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檸檬酸(CA)含量測定試劑盒 微量法

2024/9/29 13:25:23  作者:索萊寶


檸檬酸(CA)含量測定試劑盒 微量法

測定意義:CA是生物體內常見的有機酸,是重要的食品風味物質。此外,CA是三羧酸循環*步反應的產物。

測定原理:酸性條件下,檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+,在545nm處有特征吸收峰;通過測定545nm吸光值的增加,即可計算出樣品中檸檬酸含量。

需要的儀器,耗材:低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

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 檸檬酸(CA)含量測定試劑盒 微量法

操作步驟:一、樣品中檸檬酸提?。?1. 液體樣品中檸檬酸提取:取 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL,充分混勻,11000g, 4℃離心 10min,取上清液,待測。 2. 組織中檸檬酸提取:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。11000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。 3. 線粒體中檸檬酸提?。喊凑战M織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿,600g/min,4℃離心 5min;取上清另一 EP 管中,11000g, 4℃離心 10min,棄上清(此上清液可用于細胞質 CA 含量測定);向沉淀中加試劑二 200μl,以及試劑三 2μl,充分懸浮溶解,11000g,4℃離心 10min,取上清液,待測。 4. 細菌、真菌中:按照細胞數量(10 4個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min); 11000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。二、測定操作: 1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調節波長到 545 nm,蒸餾水調零。 2. 試劑一置于 30℃水浴中預熱 30min。 3. 空白管:取 0.5 mL EP 管,依次加入 20μL 蒸餾水,140μL 試劑一,20μL 試劑四,20μL 試劑五,混勻后室溫靜置 30min,于 545nm 測定吸光度,記為 A 空白管。 4. 標準管:取 0.5 mL EP 管,依次加入 20μL 標準液,140μL 試劑一,20μL 試劑四,20μL 試劑五,混勻后室溫靜置 30min,于 545nm 測定吸光度,記為 A 標準管。 5. 測定管:取 0.5 mL EP 管,依次加入 20μL 上清液,140μL 試劑一,20μL 試劑四,20μL 試劑五,充分混勻后室溫靜置 30min,于 545nm 測定吸光度,記為 A 測定管。

 相關文獻:

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281

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