氨丙啉的危害及檢測目的
氨丙啉是一種抗球蟲藥，主要以鹽酸鹽形式存在，在世界范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用于防治球蟲病。由于該藥高效、安全，不易引起球蟲耐藥性，在雞、兔、犢牛、羔羊中均有應(yīng)用。鹽酸氨丙啉雖然毒性較低，但是由于不規(guī)范使用，抗球蟲藥長期、持續(xù)添加在飼料中，極容易造成藥物在肉及蛋品中的殘留現(xiàn)象，危害人體健康。為此我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》中明確規(guī)定了氨丙啉在動物靶組織中的殘留限量。
本文闡述了如何將氨丙啉從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點(diǎn)，依據(jù)行標(biāo)SN/T 4583-2016，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。
檢測項目：氨丙啉
應(yīng)用范圍：雞肉、雞肝、雞腎、雞蛋、牛肉、牛肝、牛腎、牛脂肪和牛奶
液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
方法原理：試樣中的氯丙啉用1 %三氯乙酸-乙腈溶液（3+7）提取，經(jīng)HLB固相萃取柱凈化，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。
前處理儀器：
分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；均質(zhì)器（15000 r/min）；離心機(jī)（5000 r/min）；渦旋振蕩器；氮吹儀；具塞塑料離心管（50 mL），比色管（50 mL）。
檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源
樣品的制備、保存與要求
1.肌肉、肝臟、腎臟、雞蛋、脂肪
取樣品中又代表性的可食部分約500 g，用粉碎機(jī)粉碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識，于零下18 ℃ 冰箱內(nèi)保存。
2.牛奶
從所取全部樣品中取出有代表性樣品500 mL，充分混勻，裝入潔凈容器中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于4 ℃ 以下冷藏存放。
制樣操作過程中應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
前處理方法
1.提取
稱取試樣約5 g（精確到0.01 g ）于50 mL塑料離心管中，加入20 mL 1 %三氯乙酸-乙腈溶液（3+7），15000 r/min均質(zhì)提取1 min，5000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL比色管中，殘渣再用20 mL三氯乙酸-乙腈溶液重復(fù)提取一次，合并提取液于比色管中，定容至刻度，混勻。提取液經(jīng)濾紙過濾后待凈化。
2.凈化
分取10 mL提取濾液，于45 ℃ 氮?dú)獯抵良s3 mL，加入2 mL正己烷，渦旋振蕩30 s，5000 r/min離心5 min，棄去正己烷層，下層溶液以小于2 mL/min流速過HLB柱（6 cc/500 mg，6 mL甲醇和6 mL水活化），3 mL水洗滌樣品管后上柱，再用6 mL水淋洗小柱，抽干10 min，以6 mL甲醇洗脫并收集，洗脫液在45 ℃氮?dú)獯蹈桑?.0 mL定容液（乙酸銨-乙腈溶液4+6）溶解，過0.2 μm濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析。
國標(biāo)解讀及注意事項
1.鹽酸氨丙啉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)先用水溶解，再用乙腈定容，配成溶液濃度以氯丙啉計為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
2.本方法使用1 %三氯乙酸-乙腈溶液提取目標(biāo)化合物，正己烷除脂，HLB柱富集凈化，稀釋倍數(shù)=5，相當(dāng)于1 g試料進(jìn)行上機(jī)檢測。
3.提取液先用氮吹方法濃縮，乙腈揮發(fā)后，剩余水相用正己烷除脂后，再過柱凈化。
4.固相萃取過程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保證富集的效果。
5.本方法使用基質(zhì)曲線進(jìn)行定量分析，根據(jù)具體檢測樣品選取合適的基質(zhì)制作空白樣品基質(zhì)液。