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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性測定試劑盒

2024/12/26 13:15:18  作者:索萊寶


線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性測定試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:80mL×2 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;溶于 1mL 丙酮,可分裝后-20℃保存。臨用前再用丙酮 100 倍 稀釋后使用。 試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加入 2mL 丙酮溶解備用。 試劑四:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存;

產(chǎn)品說明: 線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶 Q 還原酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線 粒體中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同時(shí)輔基 FAD 還原為 FADH2,后者進(jìn)一步還原氧化型輔 酶 Q 生成還原型輔酶 Q,是呼吸電子傳遞鏈的支路。 復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶 Q 可進(jìn)一步還原 2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在 605nm 有 特征吸收峰,通過檢測 2,6-二氯吲哚酚的少速率來計(jì)算該酶活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微玻璃比色皿/96 孔板、丙 酮、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、復(fù)合體Ⅱ的提?。?/p>

(1) 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞,加入 1.0 mL 提取液,用勻漿器或研缽于冰上勻漿。

(2) 4 ℃ 600 g 離心 10min。

(3) 將上清液移另一離心管中,4 ℃ 11000 g 離心 15min。

(4) 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅱ(此步可選做,可以判斷線粒體提 取效果)。

(5) 在沉淀中加入 400uL 提取液,超聲波破碎(功率 20%,超聲 5 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 15 次), 用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測定,并且用于蛋白含測定。

相關(guān)文獻(xiàn):

 

《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638

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